产品货号：
WH0002
中文名称：
抗凝血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-20ml全血)
英文名称：
Extraction kit for genomic DNA from Blood anticoagulated
产品规格：
50mL血|200mL血
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒采用独特的缓冲液系统，提取0.1-20ml加入各种抗凝剂的新鲜血液和冻存血液样品基因组DNA。本缓冲液系统可最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。提取的基因组DNA片段大，产量高，纯度好，稳定可靠。本试剂盒避免使用苯酚、氯仿等有机溶剂，回收的DNA可适用于各种常规操作，如酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒特点：
1．纯净：所得DNA沉淀为无色透明。在裂解过程中可将核酸与色素等杂质高效分离，全新漂洗液使杂质去除更彻底，更适合于高纯度要求的下游实验和长期保存。
2．快速高效：经过升级的CLA溶液处理配合独特的FGA缓冲液，既可以更好的裂解红细胞释放DNA提高得率，又对基因组DNA损伤小，可以保护DNA的完整性。
3．应用广泛：可处理0.1-20ml血液样本，既可以获得高得率的DNA，OD260/230比值稳定在2.0以上，盐离子及蛋白质等杂质残留可以满足芯片杂交，高通量测序等更多对DNA纯度高的下游应用。
试剂盒组成：
保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小、且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免断裂。
2．血液样品的储存：
a)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2-8℃储存最多10天，对于某些实验例如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2-8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
b)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂）
3．所有离心操作均可在室温下完成。
提取得率（根据血液样品中白细胞数量的不同，DNA产量有所差异）
使用方法：
一、小体积全血操作流程（<600μl血样；以300μl血液处理量为例）
1．向300 μl抗凝剂的血液中加入750 μl细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次。
注意：为方便与离心机配套使用，可加入与血液等体积的细胞裂解液CLA,重复裂解两次。
2．12000rpm （~13400×g)离心1 min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3．按照表1配制缓冲液FGA与Proteinase K的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1h之内用完。
4．加入200 μl缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液FGA和Proteinase K的混合液（具体补加量见表1），再次涡旋混匀。
5．65℃水浴10min，其间颠倒混匀数次。
6．加入200 μl异丙醇，上下颠倒混匀50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
7．12000rpm（~13400×g)离心5 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入300 μl 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒弃上清。
9．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
10．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
11．加入200 μl缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热20 min溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如有难溶性物质存在，可将65℃孵育时间延长至1h。
二、中量全血操作流程（1-10 ml血样；以5 ml血液处理量为例）
1．向5 ml含抗凝剂的血液中加入5 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次，3,600rpm（~2,000×g)离心2 min，倒弃上清。
2．再向其中加入7.5 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次，3,600rpm （~2,000×g)离心2min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3．按照表1配制缓冲液FGA与Proteinase K的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1小时之内用完。
4．加入3.3 ml缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液FGA和Proteinase K的混合液（具体补加量见表1)，再次涡旋混匀。
5．65℃水浴10-30 min，其间颠倒混匀数次。
6．加入3.3 ml异丙醇，上下颠倒充分50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
7．3,600rpm（~2,000×g )离心8 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入5 ml 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清。
9．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
10．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
11．加入500 μl缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热30 min溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如果使用少量的缓冲液TB溶解DNA，孵育时间可能需要延长。
三、大量全血操作流程（10-20ml血样；以10 ml血液处理量为例）
1．处理样品：
a．离心富集有核细胞进行核酸提取：将血样3,600rpm（~2,000×g )离心15-20 min，抽弃血浆，取中间白膜层细胞加入到15 ml离心管中，加入10 ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心2 min，倒弃上清。再加入15 ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心2 min，倒弃上清。
b．细胞裂解液CLA处理血液标本分次富集有核细胞进行核酸提取：在15 ml离心管中添加细胞裂解液CLA和血液样本（比例2.5:1），多次富集进行下游实验。
（例10 ml全血处理方式：在两个15 ml离心管中分别加入5 ml的全血和10 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀5次，3,600rpm （~2,000×g )离心3 min，倒弃上清；再向其中加入2.5ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，混合到一支离心管里，3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清；进行下游操作。）
注意：细胞裂解液CLA处理步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管。在极少的情况下细胞裂解液CLA处理得到的沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。
2．按照表1配置缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，对于10-20ml的全血标本，每个样品需要6.7 ml缓冲液FGA与Proteinase K工作液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1h之内用完。
3．加入6.7 ml缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加1 ml缓冲液FGA和Proteinase K的混合液，再次涡旋混匀。
4．65℃水浴30 min，其间颠倒混匀数次。
注意：随着蛋白的消解，溶液的颜色从红色变为黄绿色。
5．加入6.7 ml异丙醇，上下颠倒混匀50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
6．离心3,600rpm（~2,000×g )离心10min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：如果得到的团块过于松弛，可以延长离心时间或者增大离心力。
7．加入10 ml 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，离心3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清。
注意：如果得到的团块过于松弛，可以延长离心时间或者增大离心力。
8．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
9．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
10．加入1 ml缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热1h溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如果使用少量的缓冲液TB溶解DNA，孵育时间需要延长。
相关搜索：抗凝血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-20ml全血)，抗凝血液gDNA提取试剂盒，全血gDNA提取试剂盒，全血基因组DNA提取试剂盒
试剂盒特点：
1．纯净：所得DNA沉淀为无色透明。在裂解过程中可将核酸与色素等杂质高效分离，全新漂洗液使杂质去除更彻底，更适合于高纯度要求的下游实验和长期保存。
2．快速高效：经过升级的CLA溶液处理配合独特的FGA缓冲液，既可以更好的裂解红细胞释放DNA提高得率，又对基因组DNA损伤小，可以保护DNA的完整性。
3．应用广泛：可处理0.1-20ml血液样本，既可以获得高得率的DNA，OD260/230比值稳定在2.0以上，盐离子及蛋白质等杂质残留可以满足芯片杂交，高通量测序等更多对DNA纯度高的下游应用。
试剂盒组成：
| 组分 | 可处理50ml血液 | 可处理200ml血液 |
| 细胞裂解液CLA | 125 ml | 2×250 ml |
| 缓冲液FGA | 40 ml | 160 ml |
| 洗脱缓冲液TB | 30 ml | 60 ml |
| Proteinase K | 250μl | 1ml |
保存条件：室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小、且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免断裂。
2．血液样品的储存：
a)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2-8℃储存最多10天，对于某些实验例如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2-8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
b)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存（如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂）
3．所有离心操作均可在室温下完成。
提取得率（根据血液样品中白细胞数量的不同，DNA产量有所差异）
| 材料 | 保存时间 | 提取量 | DNA产量 | OD260/OD280 |
| 人类全血 | 4℃一周 | 300 μl | 3-10μg | 1.7～1.9 |
| 人类全血 | 4℃一周 | 1 ml | 4-30 μg | 1.7～1.9 |
| 人类全血 | 4℃一周 | 5 ml | 100-200 μg | 1.7～1.9 |
| 人类全血 | 4℃一周 | 10 ml | 200-400 μg | 1.7～1.9 |
使用方法：
一、小体积全血操作流程（<600μl血样；以300μl血液处理量为例）
1．向300 μl抗凝剂的血液中加入750 μl细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次。
注意：为方便与离心机配套使用，可加入与血液等体积的细胞裂解液CLA,重复裂解两次。
2．12000rpm （~13400×g)离心1 min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3．按照表1配制缓冲液FGA与Proteinase K的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1h之内用完。
4．加入200 μl缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液FGA和Proteinase K的混合液（具体补加量见表1），再次涡旋混匀。
5．65℃水浴10min，其间颠倒混匀数次。
6．加入200 μl异丙醇，上下颠倒混匀50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
7．12000rpm（~13400×g)离心5 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入300 μl 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，12000rpm（~13400×g)离心2 min，倒弃上清。
9．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
10．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
11．加入200 μl缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热20 min溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如有难溶性物质存在，可将65℃孵育时间延长至1h。
二、中量全血操作流程（1-10 ml血样；以5 ml血液处理量为例）
1．向5 ml含抗凝剂的血液中加入5 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次，3,600rpm（~2,000×g)离心2 min，倒弃上清。
2．再向其中加入7.5 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀20次，3,600rpm （~2,000×g)离心2min。倒弃上清，将离心管倒置在干净的吸水纸上停留2 min，确保沉淀在管中（此步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管）。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁上清的回流。
3．按照表1配制缓冲液FGA与Proteinase K的混合液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1小时之内用完。
4．加入3.3 ml缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加缓冲液FGA和Proteinase K的混合液（具体补加量见表1)，再次涡旋混匀。
5．65℃水浴10-30 min，其间颠倒混匀数次。
6．加入3.3 ml异丙醇，上下颠倒充分50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
7．3,600rpm（~2,000×g )离心8 min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。如果样品的白细胞数量足够多，可以看到白色的DNA沉淀。
8．加入5 ml 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清。
9．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
10．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
11．加入500 μl缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热30 min溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如果使用少量的缓冲液TB溶解DNA，孵育时间可能需要延长。
三、大量全血操作流程（10-20ml血样；以10 ml血液处理量为例）
1．处理样品：
a．离心富集有核细胞进行核酸提取：将血样3,600rpm（~2,000×g )离心15-20 min，抽弃血浆，取中间白膜层细胞加入到15 ml离心管中，加入10 ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心2 min，倒弃上清。再加入15 ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，3,600rpm（~2,000×g )离心2 min，倒弃上清。
b．细胞裂解液CLA处理血液标本分次富集有核细胞进行核酸提取：在15 ml离心管中添加细胞裂解液CLA和血液样本（比例2.5:1），多次富集进行下游实验。
（例10 ml全血处理方式：在两个15 ml离心管中分别加入5 ml的全血和10 ml细胞裂解液CLA，颠倒混匀5次，3,600rpm （~2,000×g )离心3 min，倒弃上清；再向其中加入2.5ml细胞裂解液CLA，涡旋混匀10 sec，混合到一支离心管里，3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清；进行下游操作。）
注意：细胞裂解液CLA处理步骤应小心操作，为避免沉淀被倒出，推荐使用尖底离心管。在极少的情况下细胞裂解液CLA处理得到的沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清。
2．按照表1配置缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，对于10-20ml的全血标本，每个样品需要6.7 ml缓冲液FGA与Proteinase K工作液。
注意：此混合液最好现用现配，并在配好后1h之内用完。
3．加入6.7 ml缓冲液FGA与Proteinase K的混合液，立即上下剧烈震荡或涡旋混匀至溶液无团块。
注意：当处理多个样品时，加入缓冲液FGA和Proteinase K的混合液后要立即上下剧烈震荡或涡旋混匀，不要等所有的样品加完后再混匀。有可能出现痕量的胶状沉淀难以混匀，此时可再次补加1 ml缓冲液FGA和Proteinase K的混合液，再次涡旋混匀。
4．65℃水浴30 min，其间颠倒混匀数次。
注意：随着蛋白的消解，溶液的颜色从红色变为黄绿色。
5．加入6.7 ml异丙醇，上下颠倒混匀50次至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该仔细观察。
6．离心3,600rpm（~2,000×g )离心10min，倒弃上清。将离心管倒置在干净的吸水纸上，确保沉淀在管中。
注意：如果得到的团块过于松弛，可以延长离心时间或者增大离心力。
7．加入10 ml 70%乙醇，涡旋振荡5 sec，离心3,600rpm（~2,000×g )离心3 min，倒弃上清。
注意：如果得到的团块过于松弛，可以延长离心时间或者增大离心力。
8．将离心管倒置在干净的吸水纸上停留至少5 min，确保沉淀在管中。
注意：在极少的情况下沉淀可能会很松弛，所以要缓慢倒上清，将离心管倒置在吸水纸上是为了减少管壁中上清的回流。
9．空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净（至少5 min）。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。但是要避免过分干燥DNA沉淀，因为过于干燥的DNA很难溶解。
10．加入1 ml缓冲液TB，低速涡旋5 sec，65℃加热1h溶解DNA，其间轻弹数次助溶。
注意：如果使用少量的缓冲液TB溶解DNA，孵育时间需要延长。
相关搜索：抗凝血液基因组DNA提取试剂盒（0.1-20ml全血)，抗凝血液gDNA提取试剂盒，全血gDNA提取试剂盒，全血基因组DNA提取试剂盒